Mewn arbrofion diwylliant celloedd, defnyddir pibedau yn aml iawn, ac mae cywirdeb eu gweithrediad yn effeithio'n uniongyrchol ar ddibynadwyedd ac ailadroddadwyedd canlyniadau arbrofol. Mae'r canlynol yn rhai awgrymiadau ar gyfer gweithredu pibed mewn diwylliant celloedd, a fydd, gobeithio, yn ddefnyddiol ar gyfer eich arbrawf.
1. Dewiswch y pibed a'r tip cywir
- Dewis pibed: Dewiswch y pibed dde yn ôl cyfaint yr hylif i'w drosglwyddo. Ystod cyfaint gweithredu arferol y mwyafrif o bibedau yw 10-100% o'r ystod a nodwyd. Ceisiwch osgoi gosod cyfaint pibed i lai na 10% o'r cyfaint uchaf, a defnyddiwch bibed amrediad bach ar gyfer gweithrediadau pibetio cyfaint bach.
- Dewis Tip: Dewiswch domen sy'n cyd -fynd â'r pibed a sicrhau bod y domen yn cael ei mewnosod yn dynn er mwyn osgoi gollwng aer. Yn ogystal, ar gyfer arbrofion penodol (megis gweithrediad aseptig), dylid dewis awgrymiadau awtoclaf.
2. Rinsiwch y domen
Rinsiwch y domen 2-3 gwaith i ffurfio ffilm homogenaidd yn y domen, a thrwy hynny wella cywirdeb pibetio. Yn ogystal, gall niwtraleiddio'r effaith capilari mewn micropipettes, a all wneud y tymheredd y tu mewn i'r domen yn gyson â thymheredd y sampl ar gyfer pibetio cyfaint mawr. Dylid nodi y gall rinsio gael effaith andwyol ar y canlyniadau wrth bibetio toddiannau poeth ac oer.
3. Rheoli cyflymder dyhead a dosbarthu
- Gwasgu'n llyfn: Pwyswch a rhyddhewch y botwm rheoli yn llyfn ac yn barhaus, yn hytrach na'i wasgu a'i ryddhau'n sydyn. Gall hyn osgoi ffurfio swigod a gwella cywirdeb pibetio.
- Saib: Ar ôl allsugno'r hylif, gadewch y domen yn yr hylif am oddeutu 1 eiliad, yn enwedig ar gyfer yr hylifau gludiog hynny. Gall tynnu allan ar unwaith y domen arwain at ddyhead hylif anghyflawn.
4. Rhowch sylw i ddyfnder trochi'r domen
- Micropipette: Dylai'r domen gael ei throchi 2-3 mm.
- Pibed amrediad mawr: Dylai'r dyfnder trochi fod yn 5-6 mm. Os yw'r domen yn cael ei throchi yn rhy ddwfn, bydd yr aer y tu mewn i'r domen yn cael ei gywasgu, gan beri i ormod o hylif gael ei amsugno. Gall hylif sy'n weddill ar wyneb y domen hefyd effeithio ar y canlyniadau.
5. Gweithrediad fertigol
Trochwch y pibed yn y sampl mor fertigol â phosibl, yn ddelfrydol heb wyro o'r safle fertigol o fwy nag 20 gradd. Yn ogystal â gwella cywirdeb cyfaint y pibed, gall hyn hefyd atal yr hylif rhag llifo i'r pibed oherwydd gogwyddo gormodol.
6. Arsylwi ar y domen pibed
Wrth baratoi i ollwng yr hylif, rhowch sylw i weld a oes gormod o ddefnynnau ynghlwm wrth wyneb y domen pibed. Ar ôl gollwng yr hylif, gellir cyffwrdd â blaen y domen pibed i ochr y cynhwysydd i sicrhau bod y gollyngiad yn ddigon trylwyr i atal y diferyn olaf o hylif rhag aros ar flaen y domen bibed.
7. Dewiswch y dull pibetio priodol
- Dull sugno positif: Yn addas ar gyfer y mwyafrif o hylifau. Wrth sugno hylif, pwyswch y botwm i'r pwynt stopio cyntaf, yna rhyddhewch y botwm yn araf i ddychwelyd i'r man cychwyn. Yna pwyswch y botwm i'r pwynt stopio cyntaf i ollwng yr hylif, oedi am ychydig a pharhewch i wasgu'r botwm i'r ail bwynt stopio i chwythu'r hylif sy'n weddill allan. O'r diwedd rhyddhewch y botwm.
- Dull sugno yn ôl: Yn addas ar gyfer hylifau gludiog iawn, hylifau gweithredol yn fiolegol, hylifau ewynnog yn hawdd neu symiau bach iawn o hylifau. Yn gyntaf sugno mwy o hylif na'r ystod benodol, a pheidiwch â chwythu'r hylif sy'n weddill allan wrth drosglwyddo'r hylif.
8. Cadwch y pibed yn lân ac yn cael ei chynnal
- Graddnodi rheolaidd: Ar ôl defnyddio'r pibed am gyfnod o amser, mae angen ei raddnodi i sicrhau ei gywirdeb.
- Glanhau: Ar ôl pob defnydd, dylid glanhau'r pibed mewn pryd er mwyn osgoi hylif gweddilliol rhag halogi'r arbrawf nesaf.
9. Gweithrediad Aseptig
Mewn diwylliant celloedd, mae gweithrediad aseptig yn bwysig iawn. Wrth ddefnyddio pibed, rhowch sylw i'r pwyntiau canlynol:
- Diheintio: Cyn ei ddefnyddio, sychwch y pibed a'r domen gyda phêl cotwm alcohol i'w diheintio.
- Osgoi croeshalogi: Defnyddiwch domen newydd ar gyfer pob sampl er mwyn osgoi croeshalogi.
Gyda'r awgrymiadau uchod, gallwch ddefnyddio pibedau ar gyfer arbrofion diwylliant celloedd yn fwy cywir ac effeithlon, a gwella dibynadwyedd ac ailadroddadwyedd canlyniadau arbrofol. Rwy'n gobeithio y bydd yr awgrymiadau hyn yn eich helpu chi!